秀丽隐杆线虫的正确护理和维护对于实验成功至关重要。
它们需要的空间非常小，住房成本低，繁殖力高，并且易于作。但是，仅仅因为它们很容易保留并不意味着科学是懦弱的。事实上，Sydney Brenner 将秀丽隐杆线虫称为”大自然对科学的礼物”，自 1974 年推出以来，这种蠕虫已出现在许多获得诺贝尔奖的实验中。
在本视频中，我们将演示在实验室中维持秀丽隐杆线虫的基本方法，包括：蠕虫的饲养和饲喂、处理以及冷冻和解冻。
在野外，秀丽隐杆线虫存在于土壤中，以分解的植物物质为食。在实验室中，尽可能让线虫保持快乐很重要，因此我们使用非常特殊的方法为它们提供住宿和喂养。
秀丽隐杆线虫可以在 16、20 或 25 ？C 取决于实验的要求，并且可以在固体或液体培养基中生长。 在这两种情况下，它们都被喂食 OP50，这是一种标准化的大肠杆菌菌株，专门用于世界各地每个蠕虫实验室的线虫培养。
当 25 岁长大时 ？C， 秀丽隐杆线虫完成其生命周期的速度比在 16 °C 下生长时快 2.1 倍。 更快的生命周期意味着蠕虫成熟得更快，产下更多的卵并消耗更多的食物。 如果让蠕虫挨饿或变得过于拥挤，它们就会进入称为 dauer 阶段的幼虫阶段。 Dauer 幼虫具有抗逆性，不会老化。
当维持在固体培养基上时，秀丽隐杆线虫生长在用线虫生长培养基或 NGM 培养基制备的琼脂平板上生长。在制备板的前一天，用单个 OP50 大肠杆菌菌落接种液体 LB 培养基。在 37 ？C 过夜并摇晃。
要制备固体培养基，请测量适量的这些成分并将其与锥形瓶中的去离子水混合。
高压灭菌至少 15 分钟后，让琼脂冷却至 55 ？C 在水浴中。 一旦介质冷却到 55 ？C 您应该能够赤手舒适地握住玻璃容器。 使用适当的无菌技术，此时可以添加药物或抗生素等添加剂。旋转混合。然后，将熔融的 NGM 移液到培养皿中，直到它们装满 2/3。 让新制作的板子在工作台上晾干一夜。
第二天早上，以 3500 x g 的离心力沉淀 OP50 10 分钟，然后将细菌重悬于 LB 培养基中至 10X 浓度。现在，将中央草坪移液到每个板上。 避免将移液器吸头接触 NGM 的表面，并注意不要让培养物接触板壁。 将板放在工作台上晾干一夜。 干燥后，将板暴露在紫外线下进行消毒。 它们现在可以在培养蠕虫时使用。
秀丽隐杆线虫使用一种称为蠕虫镐的工具进行单独纵。镐通常由 30 号 90% 铂和 10% 铱丝制成，尽管一些研究人员可能更喜欢略有不同的金属成分。 要进行挑选，首先将巴斯德移液管的尖端折断至首选长度。
剪下约 3 至 4 厘米的金属丝，并将其 0.5 厘米放入移液管尖端内。将电线密封在本生灯上的玻璃杯上。从玻璃杯中伸出的金属丝长度约为 3 至 3.5 厘米，但可以根据个人喜好而变化。
使用硬边展平导线的末端。然后将压平的部分向上弯曲，形成一个勺子。 最后，打磨镐的边缘，以防止损坏蠕虫或琼脂。
要挑选蠕虫，请在火焰上对镐的电线进行消毒。然后用 NGM 板中浓稠、粘稠的 OP50 大肠杆菌涂覆尖端。小心不要刺穿琼脂表面或留下疤痕。
通过解剖镜观察时，将蠕虫轻轻舀到扁平的粘性镐上，直到蠕虫粘在镐上。
一旦蠕虫在镐上，立即将尖端轻轻握住新板的新表面并将其滑过细菌草坪。 蠕虫应该从镐上爬下来。 蠕虫不应在镐上停留太久，否则它可能会变干。
秀丽隐杆线虫成为一种流行的研究模型的原因之一是，培养物可以长期储存而不会产生任何不利影响。
首先，使用 0.5 ml M9 缓冲液洗涤新鲜饥饿的幼虫，轻轻旋转以松开所有幼虫和成年动物，然后转移至微量离心机或冻存管中。然后，在 M9 缓冲液中加入等量的 30% 甘油。最后，将样品瓶装入保温箱中，储存在 -80 °C。
要回收蠕虫，请从 -80 °C的冰箱中取出试管，在室温下解冻，直到内容物完全融化。将液体移液到带有 OP50 草坪的新鲜 NGM 板上，并在 20 °C 下孵育。2-3 天后，将 10-15 只动物转移到新盘中，让它们繁殖一代。 收集后代并评分以获得正确的表型。
现在我们已经了解了秀丽隐杆线虫在实验室中的维护方式，让我们看看如何为实验改变饲喂、饲养和处理条件。
获得诺贝尔奖的 RNA 干扰发现使研究人员能够沉默任何秀丽隐杆线虫基因，以确定其功能。
我们可以通过首先用表达靶基因 dsRNA 的大肠杆菌制备板来诱导秀丽隐杆线虫中的 RNAi，蠕虫会吃掉这些 dsRNA。
然后将第 4 幼虫阶段的蠕虫转移到 RNAi 板并让其产卵。 在所需的发育阶段，收集后代并进行表型评分。由于我们与蠕虫共享大约一半的基因组，因此收集到的许多见解都适用于人类疾病。
由于其生命周期短，秀丽隐杆线虫特别适合作为衰老模型。
首先，通过允许成年雌雄同体在 NGM 板上产卵，产生时间同步的秀丽隐杆线虫种群。蠕虫产卵 6-8 小时，然后被取出。
当蠕虫处于所需阶段时，它们被转移到含有氨苄青霉素以防止细菌污染和 FUDR 以防止繁殖的新 NGM 板中。
从那时起，每 2-3 天观察一次成虫，直到所有蠕虫都死亡。 从板中取出死虫，并记录活虫和死虫的数量。
在遗传或环境损伤的背景下分析寿命可以对衰老过程产生重要的见解。
使用激光可以在活的秀丽隐杆线虫中进行轴切开术或切割单个轴突，以研究神经细胞如何再生。
但是，由于蠕虫从不保持静止，因此将它们放在微珠溶液中的 10% 琼脂糖垫上。 盖玻片放在上面。 微珠增加了垫-盖玻片相互作用的摩擦系数，有效地将蠕虫冻结在原地。
该载玻片现在已准备好进行轴索切开术。神经元进入视野并在显微镜上居中。然后使用脚踏板发射激光。 最佳激光功率将切断神经元而不会伤害相邻结构。 每只动物切割尽可能多的轴突。
然后小心地从载玻片上取下琼脂糖垫，让蠕虫在 20 °C 下在接种的 NGM 板上恢复。轴切术后 8-48 小时之间，可以准备神经元进行再生评分。 在切口的远端，神经元形成一个残端。然而，在近端部分，神经元再生，形成细长的神经突。
您刚刚观看了 JoVE 进行基本的秀丽隐杆线虫维护。在这个视频中，我们回顾了：秀丽隐杆线虫的住房和喂养，处理它们，以及线虫的冷冻和回收。
我们还简要介绍了一些使秀丽隐杆线虫成为如此强大的研究工具的应用。尽管秀丽隐杆线虫在许多方面与哺乳动物不同，但它们相似的基因组成、易于维护和简单的作使它们成为寻求了解哺乳动物生物学和疾病的重要模型。 感谢观看！